合成的新型疏水色谱填料对脂肪酶有明显的分离提纯效果。以壳聚糖为载体合成疏水色谱填料。本试验建立的合成路线,简便易行,勿需用剧毒的CNBr活化,即可成功地合成出一种新型疏水色谱填料――正戊基壳聚糖。
在进行HIC以前,该柱事先用BSA走柱,以封闭一些离子结合位点,防止离子吸附作用。本试验结果表明:不仅可以吸附一定量的蛋白质和脂肪酶,并且可以分离提纯PSL,效果明显;能将PSL粗制剂分成1个穿过峰和5个洗脱峰,其中脂肪酶活力主要集中在洗脱峰2和洗脱峰3中,比活明显提高;提纯倍数在3倍左右,活力回收达到50%以上;SDS电泳扫描图谱上的杂蛋白峰明显减少;在重复使用10次时,仍有较好的纯化效果。
以壳聚糖为载体合成新型疏水色谱填料,由于其来源广泛、价格低廉、合成工艺简单易行、不需用有毒的CNBr活化等优点,因此壳聚糖将是以琼脂糖为载体的疏水色谱填料的替代产品。如果在其稳定性、使用次数、提纯效果、机械强度、流速等方面,能达到或超过以琼脂糖为载体的疏水色谱填料的质量要求,它必将在生物大分子的分离提纯等方面,有着更为广泛的应用前景。目前,该合成新工艺的优化、壳聚糖与不同醛类共价连接的一系列新型疏水色谱填料的研究,以及壳聚糖的脱乙酰度和分子量对它的影响规律等方面,尚需作进一步的深入研究。