中国流行株HIV-1gp120及其与IFNα基因共表达核酸疫苗质粒的构建

中国流行株19口120及其与咖基因共达核酸疫苗质粒的构建及达郭焱。郭巍2白求恩医科大学，吉林长春洲2；2.北华大学医学院，吉林吉林2如苗质粒口，及共达中国流行株犯1即120基因与正阶基因的核酸疫苗质粒，正。转染册21细胞。

以间接免疫，光鉴定其达产物。结果荧光显激饺下。；和；转染细这可4绿色荧光。而8他2细胞和空质粒则不绿色荧光。结论心，和6比；可在真核细达中达自的蛋白5，120.

细胞因子对免疫系统虽具有刺激作用，但体外注射细胞因子，因其半衰期短，降解很快，在体内不能维持较高水平达到特定靶细胞，而且需反复注射。随之而来的是严重的副作用。本研宄利用真核正置于02，基因的下游，构建了共达核酸疫苗质粒。

1材料和方法料10，购自，喂4公。限制1内切酶等购自丁也他公司。101标准阳性血清由邵鸣教授提供。谇硫氰酸荧光素1冗标记的羊抗人4，购，柬公司。68周龄雄性鼠，体重2，8±2购自卫生部长春生物制品研，所。

法1.2.1核酸疫苗，粒的构建到，1和也粘性末端的线性载体。用相的酶消化质粒5飞120.回收片段8120.并将其定向插入载体中，筛选重组质粒并酶切鉴定。

基金项目国家自然科学基金项目31770661作者简介郛邓1；63.女。医学硕。1.主要从事分，3核酸疫馆质粒的构建用3和队消化质粒！。，去除质粒中的回收载体并补平去用，1和8，1消化9正回收片段正并补平。将载体与片段连接，筛选正向插入1.2.2核酸疫苗质粒的真核达试验培养板的册21细胞，同时转染空白质粒1财3.1+，作为阴性对照，每1质粒转染3个于转染后721！收获细胞并裂解。

2结果2.1核酸疫苗质粒的构建名为共达1引120基大14基因的核酸疫苗质粒命名为正胸2.

22核酸疫苗质粒达产物的鉴定用核酸疫苗质粒1.17，转染1；121细胞玻片，将玻片取出，经丙酮固定染色，荧光显微镜下，1汴和1；转染细胞1绿荧光，而爪121细胞和中质粒则不绿色荧光3.

3讨论为了提高核酸疫苗的免疫应答水平，许多研究削技达免疫调节因子的质粒与含有坫原的保护性抗原质粒共同免疫，或者者克隆到同载体之中，扮较好的实骀结果31.多数细胞入1子都具有免拎调节作。代中可通过干扰炳毒复制而抑制病毒生长。此外，正，可显著增强细胞杀伤活性并迎过促进忙1类分子衣达而增强1对病毒感染细胞的识别和杀伤作用。

本实验构建的衣达喷粒，叩120与1基因间含有段十几个碱基组成的多克隆位点，能为两个开放读枢蛋白的形成提供足够的空间及柔软性，并使两种外源蛋白各自折叠成有活性的蛋白分子，为保证者抗原性正常发挥起到定的作用。